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總結：臺盼藍和FDA/PI都適用于SF9 細胞活性評估（圖 1 A），但 FDA/PI 是更優的選擇。

臺盼藍常用于評估 SF9 細胞的濃度和活性。然而，我們建議貼壁培養時避免使用臺盼藍，因其在傳代過程中需要物理吹打操作。SF9 細胞對機械力和攪拌敏感，貼壁培養時易產生細胞碎片，導致臺盼藍與樣本中各類顆粒發生非特異性結合（懸浮培養中此問題較不明顯）。
在熒光染料組合評估中，采用 AO/PI 染色的 U937 細胞作為參照驗證染料性能。盡管 AO/PI 染色對多數哺乳動物細胞有效，但其效果因細胞類型而異。實驗顯示，AO/PI 染色的 SF9 細胞信號強度較低，推測可能與昆蟲細胞基因組尺寸顯著小于哺乳動物細胞有關。通過將綠光（GF）和紅光（RF）曝光水平從哺乳動物細胞常規的 5 級調整至 7 級，雖 PI 信號充足，但 AO 信號強度仍弱。盡管所有細胞均被成功標記，AO 的弱信號仍可能影響整體檢測性能（圖 1B）。
綜合上述問題，在測試的染料組合中，FDA/PI 是 SF9 細胞計數和活性評估的。FDA 依賴細胞酯酶活性（該特性對酵母、昆蟲細胞等不同類型細胞均有效，不受基因組大小影響），可在細胞質中產生高強度信號，僅需將 GF 曝光水平降至 1 級。通過優化 LED 參數（GF 1 / RF 7），FDA/PI 染料組合成為 SF9 細胞評估的方案。