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在生物醫學研究中,準確的細胞計數至關重要,它影響著細胞治療、疾病診斷、組織再生和生物測定等應用領域。傳統的手動計數方法既耗時又容易產生偏差。像點成LUNA-III™自動細胞計數儀這樣的自動化系統,為提高計數的準確性、可重復性和效率提供了解決方案。
點成LUNA-III™自動細胞計數儀在其前身點成LUNA-II™成功的基礎上進行了多項關鍵改進,從而增強了其功能和性能。這些改進包括對大型或聚集細胞的活細胞檢測,新增的內部存儲功能和更好的自動對焦功能,重新分析數據功能以及 “查找細胞” 功能,并且在細胞濃度和活力測量方面具有出色的線性和穩定性。
#點成LUNA-III™自動細胞計數儀介紹 #
點成LUNA-II™以其高可靠性和精準度廣受認可,但它存在一個局限性——無法對死細胞團進行解聚處理,而點成LUNA-III™成功克服了這一挑戰(圖1)。由于用臺盼藍(TB)染色的死亡細胞在細胞邊界處的亮度差異極小,傳統算法很難對這些死亡細胞進行解聚處理。
點成LUNA-III™通過一種機器學習算法解決了這個問題,該算法能夠準確區分聚集細胞的形狀。同時點成LUNA-III™ 還能準確識別形狀不規則或亮度較暗的細胞,從而改進了活細胞檢測功能,確保獲得更可靠的結果。
圖 1:綠色圓圈表示活細胞,紅色圓圈表示死細胞。點成LUNA-III™在細胞聚集和形態多樣性情況下仍能精準識別死細胞,展現了其的算法性能。
除了這一關鍵改進之外,點成LUNA-III™還擁有多項新功能,旨在提升用戶體驗和工作流程效率:
內部存儲:可直接在設備上保存和管理數據,簡化工作流程,確保輕松訪問結果。
重新分析:可重新分析先前捕獲的圖像,以確保數據分析的準確性和一致性。
查找細胞:利用”查找細胞“功能自動調整焦平面和曝光水平,確保分析全面且精確。
這些改進使點成LUNA-III™成為了高精度、高效率細胞計數與存活率評估的理想工具,進一步鞏固其在細胞分析領域作為可靠且創新解決方案的地位。
#點成LUNA-III™自動細胞計數儀 #
所有測量均使用點成LUNA-III™的默認方案設置,并使用了三臺點成LUNA-II™設備,在標準質量控制程序后測試其內部偏差。
#細胞系和試劑 #
實驗采用U937(懸浮細胞)和3T3(貼壁細胞)兩種細胞系。U937細胞培養于RPMI-1640培養基(含10% FBS和1%/),3T3細胞培養于DMEM培養基(含10% FBS和1%/)。使用0.4%臺盼藍(貨號T13001)進行活力評估。
#細胞濃度和活力的線性 #
細胞以1×10?個細胞/mL濃度(3T3細胞為6×10?個細胞/mL)開始進行梯度稀釋,并使用點成LUNA FX7™全自動細胞計數儀測量濃度。活細胞取自指數生長期的培養物,死細胞通過在100℃加熱30分鐘獲得。不同比例的活細胞和死細胞混合形成不同活力的樣本,以評估存活率線性度。
#細胞濃度的線性 #
為評估點成LUNA-III™的細胞計數線性度,從以下三方面進行了測試:(1)不同技術人員之間的差異(圖2A)、(2)不同細胞系之間的差異(圖2B)、(3)點成LUNA-III™與血球計數板測量結果的對比(圖2C)。
首先,由兩名經驗不同的技術人員分別測量梯度稀釋的U937細胞濃度,結果顯示點成LUNA-III™在不同用戶操作下仍保持高線性度(R2≥0.9997)。然后由一名技術人員測量U937和3T3細胞的梯度稀釋樣本,點成LUNA-III™依然展現出的線性度。最后,將點成LUNA-III™的計數結果與血球計數板進行對比,點成LUNA-III™同樣表現出的線性度(R2≥0.9996)(圖2D)。這些結果證明點成LUNA-III™無論在不同操作人員還是不同細胞類型情況下,均能提供穩定可靠的細胞濃度測量。
圖2.(A)不同經驗技術人員測量U937細胞的線性度,點成LUNA-III™表現出R2≥0.9997的高一致性。(B)U937和3T3細胞的線性測量對比,R2≥0.9998。(C)點成LUNA-III™與血球計數板測量對比,R2≥0.9996。(D)點成LUNA-III™計數的U937(上)和3T3(下)細胞圖像,展現其精準穩定的細胞檢測能力。
#細胞系與試劑 #
為了評估點成LUNA-III™在不同細胞系的活力線性度,我們混合不同比例的活細胞和死細胞,得到存活率從0%到99%的樣本,并由一名技術人員測量。結果表明點成LUNA-III™在U937和3T3細胞的存活率測量中均表現出的線性度(R2≥0.9998)(圖3A)。此外,其細胞圖像清晰地展現了準確識別的活細胞(綠色圓圈)和死細胞(紅色圓圈),進一步驗證了點成LUNA-III™的準確性(圖3B)。這些數據表明點成LUNA-III™在不同細胞類型間均能提供高度可靠的存活率測量。
圖3.(A)U937(藍色)和3T3(紅色)細胞的存活率測量結果,點成LUNA-III™表現出的線性度。(B)點成LUNA-III™計數的U937(上)和3T3(下)細胞圖像,清晰識別活細胞(綠色)和死細胞(紅色)。
結論
點成LUNA-III™全自動細胞計數儀在細胞計數和存活率評估方面取得了顯著進步,彌補了點成LUNA-II™在死細胞聚團檢測和不規則形態細胞存活率檢測上的不足。其新型機器學習算法、內部存儲、數據重分析及“查找細胞”功能,使其成為研究人員高效、精準、可靠的細胞分析工具。實驗結果證實點成LUNA-III™在細胞濃度和存活率測量方面具備的線性度和穩定性,適用于常規細胞計數及更復雜的存活率評估需求,為研究人員提供了高效、精準、易用的解決方案。
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